Kaalulangus cf-i patsientidel

Ravimid, mida pole Venemaal tsüstilise fibroosiga patsientidel testitud! Puudusid tugevad tõendid seose kohta testimise ja ema ja isa perekonnaliikme seisundi vahel.

Gutless rekombinantsete SVst saadud CFTR-vektorite in vitro ja in vivo funktsionaalne iseloomustamine Abstraktne Tsüstilise fibroosi CF puhul on progresseeruva hingamisteede obstruktsiooni ja koekahjustuse põhjustatud hingamispuudulikkus peamiselt tingitud Pseudomonas aeruginosa kopsuinfektsioonide põletikulistest reaktsioonidest.

Vaatamata patsientide ellujäämise märgatavale paranemisele on tavapärased ravimeetodid peamiselt toetavad. Viimased edusammud CFi geeniteraapia suunas on olnud julgustavad; CF-geeniteraapia potentsiaalseteks piiranguteks on siiski mitmeid tegureid, nagu immuunvastus ja transdutseeritud rakkude käive.

CF-i alternatiivsete geeniteraapia vektoritena uurisime rekombinantsete SVpõhiste vektorite rSVde kasutamise võimalust, mis võivad kõrvale hoida mõningaid neist takistustest.

kaalulangus cf-i patsientidel rasva kaotuse nagu kortsud

Põletikuliste tsütokiinide taseme vähenemine tõi kaasa ilmse neutrofiilide sissevoolu vähenemise hingamisteedesse. Sissejuhatus Tsüstiline fibroos CF on üks levinumaid geneetilisi haigusi.

Hoolimata hiljuti tavapäraste ravimeetodite ellujäämise märkimisväärsest paranemisest, muutuvad CF-i patsiendid üha nõrgemaks ja nende eluiga on märkimisväärselt lühenenud, peamiselt korduvate kopsuinfektsioonide tõttu. CF-i geneetiline defekt on hästi dokumenteeritud: mutatsioonid rakumembraani kloriidikanalis ja tsüstilise fibroosi transmembraanses juhtivuse regulaatoris CFTR.

Saadud defektse rakulise kloriidi transportimisel on palju tagajärgi. CF-patsiendid toodavad väga viskoosseid limaskestasid, mille peamised tagajärjed on eksokriinsete pankrease puudulikkus ja korduvad kopsuinfektsioonid.

Viimane põhjustab hingamispuudulikkust. Geeniteraapia näib olevat potentsiaalselt kasulik terapeutiline lähenemine. Kuid vaatamata suurtele pingutustele ei ole CFTR-i geeni toimetamine kopsudesse veel suutnud haiguse kulgu muuta.

Tsüstilise fibroosiga laste toitumisreeglid

Nende hulka kuuluvad ebakindlus, millised on geeni kohaletoimetamise kõige sobivamad rakulised sihtmärgid, parim manustamisviis, viskoossed, neutrofiilsed ja bakteririkased limaskestad, mis mõlemad lagundavad vektoreid ja takistavad hingamisteede kaudu manustatavate vektorite jõudmist sihtepiteeli rakkudesse, antigeensust geeni ülekandemehhanismide ja võimaliku vajadusega korrata geeni kohaletoimetamist, et kompenseerida vektori DNA kadu ja transdutseeritud rakkude liikumist.

Need vektorid integreeruvad raku genoomi, et tagada püsiv transduktsioon ja transdutseerida enamik rakutüüpe väga tõhusalt. Geeniülekandevektorite seas saab rSVsid korduvalt manustada ilma transduktsiooni efektiivsuse kadumiseta normaalsetele immunokompetentsetele isikutele.

Mõningad raskused, mis tekkisid selle püüdluse saavutamiseks, peegeldavad CF-i loomulikku patofüsioloogiat, samas kaalulangus cf-i patsientidel teised on tingitud geeniülekande tehnoloogia piirangutest. RSVde rakendamine sellele haigusele võib kõrvale hoida mõningaid neist takistustest, näiteks nende vektorite neutraliseerivate antikehade puudumine võib hõlbustada võimalikku korduva manustamise vajadust.

Meie andmed näitavad, et sellised gutless rSV40 vektorid on kergesti toodetud COS-7 rakkude poolt väga kõrge tiitriga, ilma abistaja viiruseta või korduva kotransfektsioonita.

Praegused in vitro läbi viidud uuringud on kavandatud selleks, et testida, kas SVst saadud vektorid mahutavad CFTR cDNA-d, toimetavad selle rakkudesse ja annavad funktsionaalse kloriidikanali. Saadud CFTR valk lokaliseerub rakumembraanidele ja annab funktsionaalse kloriidi kanaleid ning annab otsese rasva kadumise riided parandava toime kohta in vitro.

Higi test, mis see on

Lisaks viisid need uuringud vektori testimisele CFTR-ga seotud haiguse hiiremudelis, kus vektor suutis nõrgestada ja mõnel juhul kõrvaldada hingamisteede põletikku, mis oli seotud trahheaalse bakteriaalse instillatsiooniga. See on näidatud joonisel 1.

kaalulangus cf-i patsientidel maximusse rasvapoleti ulevaade

Seetõttu kasutasime neid rakke rSVCFTR transduktsiooni efektiivsuse ja tarnitud valgu subtsellulaarse lokaliseerimise määramiseks.

Seejärel uuriti neid fluorestsentsmikroskoopia abil pärast immuniseerimist CFTR antikehaga joonis fig 2a. Suurem suurendusanalüüs joonis fig 2b näitas immunodetekteeritava CFTR lokaliseerimist mööda rakumembraani.

CFPAC kaalulangus cf-i patsientidel ja CF pankrease adenokartsinoomi rakuliin kanti nelja süvendiga slaididesse tihedusega 10, 5 rakku süvendi kohta. A ja b puhul visualiseeriti värvimine Olympus fluorestsentsmikroskoobi abil ja digiteeritud Spot Image Analysis Software, Diagnostic Instrumentskasutades Macintoshi arvutit.

kaalulangus cf-i patsientidel kuidas murda koht rasva

CFPAC-rakke, mis on transdutseeritud vastavalt punktile auuriti konfokaalse mikroskoopia abil, kasutades Biorad MR konfokaalmikroskoopi. Täissuuruses pilt Seega, rSVCFTR-i poolt manustatud valgu subtsellulaarse lokaliseerimise lõplikumaks hindamiseks tehti konfokaalsed mikroskoopilised uuringud.

Need uuringud kinnitasid, et tarnitud CFTR paiknes rakumembraanil. Valgu jagunemine oli lünklik, nagu on teatanud teised.

Kandjal testimine peredes pärast tsüstilise fibroosi diagnoosi vastsündinu sõeluuringu abil

Läbilaskvust Cl-le hinnati fluorestsentsi muutusena aja funktsioonina pärast forskoliini lisamist. Kontrollrakud olid Kaalulangus cf-i patsientidel rakud, mis on tavalised simian neerurakud kaalulangus cf-i patsientidel, Janet Butel, Kaalulangus cf-i patsientidel meditsiinikolledž. Cl-kanali aktiivsuse mõõtmiseks kasutati mikroplaadi analüüsi tehnikat, nagu on kirjeldanud West ja Molloy. Täissuuruses pilt Täiendava testina selle kohta, kas rSVCFTR võib edastada funktsionaalse Cl-kanali ja teha kindlaks, kas kanali aktiivsust saab taastada erinevas rakuliinis, teostasime 36 Cl isotoopi märgistusjälje analüüsi IB rakkudel.

Seejärel mõõdeti väljavoolukiirus 30 s intervalliga 4, 0 min. Pärast viimast ajapunkti uuriti monokihti hoolikalt selle terviklikkuse osas.

Maovähendusoperatsioon - miks kaal langeb?

Katse käigus eemaldati mitteläbilaskvate monokihtidega kolvid. Proovid loendati Cl 36 aktiivsuse jaoks. Proovid segati CytoSafe stsintillatsioonivedelikuga ja loendati 36 Cl aktiivsuse jaoks.

Tuleb märkida, et see ekspressioon esindab hiiri umbes 9 nädalat pärast rSVCFTR-i intra-trahheaalset manustamist ja pärast seda, kui nad on läbinud pseudomonas agar-bead väljakutsed, rõhutades seega transgeeni ekspressiooni stabiilsust, mis saavutati gSV40 geeni kohaletoimetamisega.

See stabiilsus on täiendav tõendusmaterjal eraldi katsega, kus hiirte kopsukudede IHC analüüs, mis sai 2, 4 ja 9 nädalat pärast manustamist surnud AU1 epitoopiga märgistatud rSV40 vektori, ei näidanud epitoopmärgise ekspressiooni ilmset langust. Hiirte täiendav analüüs 9 nädalat pärast manustamist näitas, et AU1 epitoobi ekspressiooniga määratud rSV40 transduktsioon oli ilmne kogu hingamisteedes, kaasa arvatud limaskestasid tootvates rakkudes, nagu määrati AUI ekspresseerivate rakkude ja lüsaasi tootvaid rakke ekspresseerivate lüsosüümide ülekatte abil joonis fig.

Varem on teatatud, et lüsosüümi toodavad submukoossed näärmed ja pundirakud.

kaalulangus cf-i patsientidel epiphany gh kaalulangus

Täissuuruses pilt Limaskestasid tootvate rakkude transduktsioon hingamisteedes rSVga. Hiired said 1, 5 x rSV40 vektori osakest koos AU1 epitoopmärgisega ja surmati 9 nädalat pärast manustamist.

Paremal on kolm fluorestsentsmikrograafi, ülemine, kasutades lüsosüümi suhtes suunatud antikeha, et piirata limaskestasid tootvaid rakke, kes kasutab antikeha AU1 märgise vastu ja alumine paneel näitab nende kahe pleki ühendamist, milles valged nooled näitavad representatiivseid kahekordselt positiivseid rakke.

kaalulangus cf-i patsientidel kuidas poletada olavarre rasva

Samuti oli CF-ga seotud kopsuhaiguse puhul oluline suundumus P. KC loetakse hiire analoogiks ILga ja vastutab peamiselt neutrofiilide värbamise eest kopsudesse. Põletikuliste tsütokiinide profiilide nõrgestamine CFTR-korrigeeritud hiirte kopsukambris. Nagu esimeses ülalkirjeldatud katses, 8 nädalat pärast rSV40 manustamist, nakatati hiirtele Ps-graanulite suspensioon, kuigi valmistamisvariatsioonide tõttu oli see veidi madalam cfu arv 3, 0 x cfu ml —1.

Selle teise kohordi kopsuosade histopatoloogiline analüüs näitas kopsukoe infiltratsiooni ja põletiku dramaatilist vähenemist joonised 9 ja Kontrollvektoriga ravitud kaalulangus cf-i patsientidel ilmnes hingamisteede raske põletikuline infiltreerumine fokaalse haigusega parenhüümas, millega kaasnes sageli epiteeli lagunemine ja sloughing. Sellega kaasnes neutrofiilide ja II tüüpi pneumotsüütide hüperplaasia silmapaistev esinemine. Need leiud olid rSVCFTR-ga ravitud loomadel väga nõrgestatud; nende muutuste statistiliselt olulist suurust saab hinnata sõltumatu pimendatud patoloogi põletikulistes punktides tabel 1.

Nagu on näidatud esimeses eksperimentide komplektis, olid CFC-korrigeeritud hiirtel KC ja teised põletikulised tsütokiini tasemed madalamad ning nende nõrgestatud tsütokiini vastuste mõju võib mõõta BAL-idest teisel korral taastunud neutrofiilide olulisel vähenemisel.

Seega oli vektorgenoomi suurus 5, 5 kb selle süsteemi pakendipiiride piires. Mõned teised vektorisüsteemid nõuavad pakendirakkude samaaegset kotransfekteerimist mitme plasmiidiga või co-infektsiooni abistaja viirustega, et toota gutless vektoreid, kuid rSV40, millel puuduvad kapsiidi geenid, efektiivne pakendamine COS-7 rakkudes näitab, et pakendatud rSV40 genoomid ei pea kandma SV40 kapsiidi geenid.

Viimased väljenduvad adekvaatselt COS-7 rakkude poolt nende enda promootori poolt juhituna: ei ole tegemist abistaja viirusega ega ka kotransfektsiooniga.

Esialgsed uuringud näitavad, et SV40 kapsiidi geene SV40 hilise promootori kontrolli all ei ekspresseerita konstitutiivselt COS-7 rakkudes, kuid hilise promootorit sisaldava replikeeruva rSV40 genoomi olemasolu on piisav COS-7 transkriptsiooni aktiveerimiseks. Mariere ja DS Strayer, avaldamata andmed. Selle nähtuse võimalikuks selgituseks on see, et SV40 genoomide replitseerimine tiitrib rakulise repressori, mis inhibeerib integreeritud SV40 hilise geenide transkriptsiooni.

  1. Tsüstilise fibroosiga laste toitumisreeglid - Dieedid
  2. Venemaa tsüstilise fibroosi keskuse piirkondlik osakond Ilyenkova N.

Saadud ebanormaalne valk võib tegelikult moodustada funktsionaalse Cl-kanali, kuid F kadumine põhjustab valgu ekslikul kokkuviimise ja sellest tulenevalt lõhustumiseks rakulise proteosoomi, nii et see ei jõua rakumembraanini, mis toimib ioonkanalina.

In vitro uuringud näitasid ka, et rSV40 geeniülekanne muutis nende kultuuride suurema osa rakke ilma selektsioonita. See leid on kooskõlas eelnevate andmetega, mis näitavad, et rSVis saab transgeeni ekspressiooni efektiivselt edastada ja ei vaja selektiivse aine kasutamist.